Florence Pernel débute sa carrière de manière précoce, à dix ans dans le téléfilm Plein Soleil et est nommée à quinze ans aux Césars dans la catégorie Meilleur espoir pour son rôle dans Que les salaires lèvent le doigt !
Menant de front sa carrière à la fois au cinéma et à la télévision, Florence Pernel s’essaie aussi au théâtre dans Un tramway nommé Désir, pour lequel l'actrice est nommée aux Molières. Dès lors, les rôles s'enchaînent sur scène et Florence Pernel se voit nommée une deuxième fois aux Molières avec la pièce La Boutique au coin de la rue.
2013 Quadrille de Sacha Guitry, mise en scène Bernard Murat, Théâtre Édouard VII
2012 Le Dindon de Georges Feydeau, mise en scène Bernard Murat, Théâtre Édouard VII
2011 Quadrille de Sacha Guitry, mise en scène Bernard Murat, Théâtre Édouard VII + tournée
2007 Un type dans le genre de Napoléon de Sacha Guitry, mise en scène Bernard Murat, Théâtre Édouard VII
2007 La Mémoire de l'eau de Shelagh Stephenson, mise en scène Bernard Murat, Petit Théâtre de Paris
2001 La Boutique au coin de la rue de Miklós László, mise en scène Jean-Jacques Zilbermann, Théâtre Montparnasse
1999 Un tramway nommé Désir de Tennessee Williams, mise en scène Philippe Adrien, Théâtre de l'Eldorado
2010 : La conquête de Xavier Durringer
2009 : Signé Dumas de Safy Nebbou
2002 : À la p’tite semaine de Sam Karmann
1999 : Yoyes d’Hélèna Taberna
1997 : Vive la République d’Éric Rochant
1996 : L’éloge de la maîtresse de Manolo Lombardero
Violetta la reine de la moto de Guy Jacques
1992 : Le bateau de mariage de Jean-Pierre Améris
Bleu de Krzystof Kieslowski (nomination César meilleur espoir féminin)
1989 : Cellini de Giacomo Battiato
L’affaire Wallraff de Bobby Roth
Mauvaise fille de Régis Franc
1989 : Cellini de Giacomo Battiato
L’affaire Wallraff de Bobby Roth
Mauvaise fille de Régis Franc
C'est à la télévision que Florence Pernel obtient un rôle important, celui du juge Larrieu dans la série Le juge est une femme.
2010 : Louis XI d’Henri Helman
2009 à 2011 : Mes amis, mes amours, mes emmerdes de Jérôme Navarro
2008 : Françoise Dolto, le désir de vivre de Serge Le Péron
Sang d’encre de Charlotte Brandstrom
2007 : Le fantôme de mon ex de Charlotte Brandstrom
2006 : Marie Imbert de Marc Angelo
Monsieur Léon de Pierre Boutron
2004 : Jaurès, naissance d’un géant de Jean-Daniel Verhaeghe
Bel ami de Philippe Triboit
2003 : Lagardère d’Henri Helman
Le voyageur sans bagage de Pierre Boutron
2002 : Les Thibault de Jean-Daniel Verhaeghe
2001 : Napoléon d’Yves Jimoneau
2000 : La femme de mon mari de Charlotte Brandtrom
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